Косметика, медицина

Механические повреждения клеток крови (например, вследствие выпускания крови из шприца в пробирку с силой или интенсивного встряхивания при перемешивании) также могут сказаться на результатах определения активности ферментов. Хранение сыворотки также неблагоприятно сказывается на результатах определения активности многих ферментов (они занижаются), поэтому следует измерять активность ферментов в сыворотке в день взятия крови у пациента. Длительное хранение крови приводит к активации протеолиза, потери четвертичной структуры вследствие негативного влияния на SH-группы, что сказывается на активности ферментов.

16. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных наборов и их компонентов, указанные в инструкции, т. к. ферменты - термолабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре, например в комнате вместо холодильника, может привести к быстрой инактивации ферментов. Амилаза, липаза, лейцинаминопептидаза (ЛАП), ГГТ, холинэстераза, кислая фосфатаза устойчивы при хранении, стабильность других ферментов варьирует. Многие ферменты можно хранить в замороженном состоянии и в виде лиофилизатов без потери активности, однако некоторые ферменты чувствительны к процедуре замораживания, их можно замораживать только после добавления стабилизаторов, сохраняющих их структуру. Это связано с тем, что вода при кристаллизации вызывает необратимые изменения в водородных связях белка. Например, уреаза при замораживании частично или полностью инактивируются. Особенно чувствительны к процедуре замораживания ферменты, состоящие из нескольких субъединиц. Не допускается при хранении несколько раз замораживать и размораживать пробы.

17. Следует регулярно проверять правильность и воспроизводимость результатов анализа по контрольным сывороткам, аттестованным соответствующими методами. В случае определения активности ферментов учитывать, каким рекомендациям соответствует используемый метод.

Многие из перечисленных выше правил применимы и просты в выполнении. В то же время их соблюдение гарантирует высокую точность и воспроизводимость результатов.

СПОСОБЫ ВЫРАЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

Каталитическая активность фермента - это способность фермента превращать большое количество молекул субстрата, в то время как сам он к концу реакции остается неизменным. Ферменты различаются по своей каталитической способности. Например, 1 моль трипсина осуществляет 102 цикла в секунду, глюкозоксидаза - 17 х 103 циклов в секунду и т. д. Это называется «числом оборотов фермента». Число оборотов варьирует от 1 до 106 в зависимости от природы фермента. Каталитическую активность ферментов выражают в единицах активности.

Международная единица активности (МЕ) - это количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 минуту в оптимальных условиях.

Единица активности в системе СИ (катал) - соответствует количеству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в 1 секунду в оптимальных условиях.

Соотношение между единицами активности:

1 ME = 16,67 нанокатал;

1 катал = 6 X 107 ME.

В медицине активность ферментов выражают чаще всего в единицах активности на 1 л биологической жидкости.

Удельная активность фермента - это активность, выраженная в единицах активности на 1 мг (или 1 г) белка или 1 мг (1 г) препарата фермента. Используется в биохимической практике.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ОТДЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ

Алкогольдегидрогеназа

Алкогольдегидрогеназа (АДГ; КФ 1.1.1.1.) печеночный цитоплазма-тический фермент, класса оксидоредуктаз. АДГ является цинксодержащем ферментом и преимущественно располагается в центролобулярном регионе печени. Алкогольдегидрогеназа способна нейтрализировать небольшие дозы алкоголя. Содержится в организме южных народов, но почти отсутствует у северных, в том числе у украинцев, русских. Фермент катализи-руюет в присутствии НАД окисление спиртов и ацеталей до альдегидов и кетонов.

Идентифицированы изоферменты АДГ, специфичные для печени, слизистой желудка и почек. В больших количествах фермент находится лишь в печени, но небольшие его количества содержат почки. Следы фермента также обнаруживаются в сердечной и скелетной мускулатуре человека. В сыворотке крови здорового человека отсутствует. Активность АДГ ответственна за метаболическое превращение метанола и этиленгликоля в токсические соединения. Этот эффект тормозится введением этанола. Изоферментный спектр алкогольдегидрогеназы печени отражает патологические изменения в организме, что используется для диагностических целей. АДГ - семейство тесно связанных ферментов с выраженным полиморфизмом, что может влиять на скорость выведения этанола. Резкое повышение содержания фермента наблюдается при острых гепатитах (при этом его показатели приходят к норме раньше, чем показатели трансаминаз). При обтурационной желтухе, циррозах печени, инфаркте миокарда, мышечной дистрофии Эрба обычно не наблюдается повышения активности фермента в крови. Цианиды, йодоацетат тормозят действие эн-

зима. Является специфическим для клеток печени. Появление его в сыворотке крови свидетельствует о повреждении клеток печени. Служит критерием выраженности гепатоцеллюлярного некроза и внутрипеченоч-ного холестаза. АДГ рассматривается как высокочувствительный маркер аноксии печени с поражением центров долек. Изоформы алкогольдегидро-геназы имеют большое значение в дифференциальной диагностике заболеваний печени. Так, АДГ1 повышается при вирусных гепатитах, АДГ2 - при алкогольных гепатитах, активности АДГ3 так же, как и АДГ2, чаще увели-чиваються при циррозе печени. Референтные пределы: <2,8 МЕ/л • 0,017 [<0,05 мккат/л].

Альдолаза

Альдолаза (фруктозобисфосфат-(фруктозодифосфат)-альдолаза; КФ 4.1.2.13) - фермент, относящийся к лиазам, катализирующий превращение фруктозо-1,6-дифосфата (бисфосфата) в дигидроксиацетонфосфат и глице-ральдегид-3-фосфат в процессе гликолиза. Фермент играет важнейшую роль в энергетическом обмене. Молекулярная масса фермента 147-180 кДа, состоит из двух полипептидных цепей. Альдолаза присутствует во всех тканях организма. Генетически обусловленная неполноценность альдолазы является причиной наследственной непереносимости фруктозы.

В норме в сыворотке крови активность альдолазы составляет от 0,0038 до 0,02 (в среднем 0,012) мкмоль фруктозо-1,6-дифосфата, превращенного ферментом, содержащимся в 1 мл сыворотки крови, за 1 мин при 37 °С.

Активность альдолазы в крови служит дополнительным диагностическим признаком ряда заболеваний. В ткани злокачественных опухолей фермент в несколько раз активнее, чем в неизмененных тканях, в эритроцитах активность фермента в 100 раз выше, чем в сыворотке крови, гемолиз существенно искажает результаты анализа. При ряде заболеваний (прогрессирующая мышечная дистрофия, инфаркт миокарда, активный ревматизм, рак, поражения печени и др.) активность альдолазы в крови повышается, причем тем значительнее, чем тяжелее протекает болезнь.

В качестве унифицированного метода определения альдолазы принят метод Товарницкого-Валуйской, основанный на том, что продукты расщепления фруктозо-1,6-фосфата альдолазой при реакции с 2,4-динитрофенилгидразином образуют гидразоны, окрашенные в щелочной среде. Интенсивность окраски пропорциональна активности фермента.

Альфа-амилаза

Альфа-амилаза (1,4-а-В-глюкан глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов, содержащих a-D-глюкозу до простых моно- и дисахаридов (мальтоза, глюкоза). Атакуются связи между 1 и 4 атомами углерода, связи в полисахари- Ногами заказать косметику. Заказать косметику avon.