Косметика, медицина

Окончание таблицы 2

Определение активности ГГТ основано на измерении скорости ферментативной реакции переноса гамма-глутамиловой группы с субстрата-донора на субстрат-акцептор. В первом методе определения активности фермента был использован его природный субстрат глутатион. Однако этот метод сложен в постановке, поэтому в клинической биохимии широкого распространения не получил. Современные лабораторные способы определения активности ГГТ основаны на применении синтетических хромогенных субстратов-доноров. Начиная с 1960-х годов в качестве такого субстрата большинство биохимических лабораторий использовало гамма-глутамил-р-нитроанилид, а в качестве субстрата-акцептора гамма-глутамиловой группы - глицилглицин. Данный колориметрический тест основан на следующей ферментативной реакции:

L-гамма-глутамил-р-нитроанилид + глицилглицин -> L-гамма-глутамилглицилглицин + р-нитроанилин

Активность ГГТ определяется по скорости расщепления хромоген-ного субстрата с образованием р-нитроанилина, интенсивность окраски которого (оптическая плотность при длине волны 405 нм) пропорциональна активности фермента в анализируемой пробе. Широкое применение данного метода на практике и в научных исследованиях позволило установить нормальные значения активности ГГТ в сыворотке крови пациентов различного возраста и пола, а также величин, соответствующих различным патологическим состояниям, на которые ориентируются и в настоящее время.

К недостаткам применения гамма-глутамил-р-нитроанилида в качестве хромогенного субстрата относится его низкая растворимость, затрудняющая приготовление его раствора с необходимой концентрацией, а также недостаточная стабильность рабочего раствора, в котором при хранении спонтанно образуется р-нитроанилин. Этих недостатков лишен широко применяемый в настоящее время для анализа ГГТ гамма-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилид (ГГКНА). Этот субстрат с растворимостью в 50 раз выше, чем гамма-глутамил-р-нитроанилид, образует высокостабильные растворы. Кинетические константы ферментативной реакции для обоих субстратов сходны.

Международная федерация клинической химии (IFCC) рекомендует в качестве референтного метода определения активности ГГТ колориметрический кинетический метод с ГГКНА в концентрации, обеспечивающей максимальную скорость ферментативной реакции (6мМ). Однако для рутинного анализа в лабораториях чаще применяют модифицированный метод Зейца (Szasz), в котором концентрация с ГГКНА ниже (3-4 мМ). Результаты определения активности ГГТ, получаемые при этом, ниже (приблизительно на 7 %), чем по методу IFCC, однако они полностью совпадают со значениями активности фермента, определенными с применением в качестве субстрата гамма-глутамил-р-нитроанилида. Метод Szasz дает возможность использовать установленные ранее привычные нормы активности ГГТ и весь накопленный клинический опыт.

Глутаматдегидрогеназа

Глутаматдегидрогеназа (ГДГ; КФ 1.4.1.3) - фермент, катализирующий превращение глутамата в 2-оксоглутарат и аммиак. ГДГ в незначительных количествах обнаружен в нервной ткани, скелетных мышцах, миокарде и молочной железе, в наибольшем количестве содержится в клетках печени. Уровень активности ГДГ в норме 0-0,9 МЕ/л (Назарен-ко Г. И. и др., 2002). Фермент находится внутри митохондрий гепатоцитов, поэтому увеличение его активности отражает глубину цитолиза клеток; по степени ее повышения можно судить о тяжести патологического процесса. Увеличение активности фермента происходит при поражении печени различной этиологии и поражении желчевыводящих путей: острые гепатиты с

некрозом печени, рак печени, печеночная кома, острая интоксикация, механическая желтуха и т.п. При вирусном гепатите ГДГ повышается в первые сутки желтушного периода. Высокая активность ГДГ отмечается у больных первичным и метастатическим раком печени. При выраженном обострении цирроза печени подъем активности ГДГ бывает значительным, причем высокая активность фермента рассматривается как неблагоприятный признак. Алкогольная интоксикация сопровождается значительным увеличением активности ГДГ в крови.

Повышение активности ГДГ и ГГТ во многом сходно, но есть различия: высокая активность ГДГ наблюдается при острых повреждениях печени, а высокая ГГТ - при длительных патологических процессах в печени.

Одновременное исследование активности ГДГ и сорбитолдегидроге-назы (СДГ) позволяет рассчитать коэффициент СДГ/ГДГ. В первую неделю вирусного гепатита этот коэффициент обычно превышает 0,5, составляя в среднем 1,3. В первую неделю обтурационной желтухи он ниже 0,5.

Глутатионредуктаза

Глутатионредуктаза (ГР; КФ 1.6.4.2) - НАДФ-зависимый фермент, катализирующий превращение окисленной формы глутатиона в восстановленную. ГР присутствует практически во всех тканях, но наибольшее его содержание в почках, печени, сердце и эритроцитах. Повышение активности фермента наблюдается при гепатите, механической желтухе, сахарном диабете, при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, серповидной и мегалобластной анемиях, после введения никотиновой кислоты, после физической нагрузки. Недостаток ГР отмечается при дефиците рибофлавина.

Глутатионпероксидаза

Глутатионпероксидаза (ГП, КФ 1.11.1.9) - один из ключевых ферментов антиоксидантной системы организма, функцией которого является разрушение и инактивация пероксидов водорода и гидропероксидов (пе-роксидных радикалов) - токсичных соединений кислорода. Содержится практически во всех тканях. В норме активность фермента в эритроцитах составляет 29,6-82,9 МЕ/г ПЬ (Назаренко Г.И. и др., 2002).

ГП клеток печени состоит из четырех субъединиц, каждая из которых содержит в активном центре атом селена. В клетках печени ГП локализована в цитозоле и матриксе митохондрий. Таким образом, Н2О2, образующаяся при работе пероксисомальных ферментов, удаляется содержащейся в пероксисомах каталазой, а Н2О2, образующаяся в митохондриях и эндоплазматическом ретикулуме, разрушается преимущественно под действием ГП. ГП обладает в 1000 раз большим сродством к Н2О2 по сравнению с каталазой, поэтому ГП рассматривают в качестве антиоксидантного фермента, имеющего первостепенное значение в защите клетки от посто- Вокруг заказать косметику. Специальный заказать косметику.